Catalog Numbers : ag118/ag118-2/ag-118-3
Components | ag118-100 rxns | ag118-1000 rxns | ag118-2000 rxns |
SYBR Green qPCR Master Mix (2×) | 1 mL | 5 mL | 5 mL × 4 |
ROX Reference Dye (50×) | 40 μL | 400 μL | 800 μL |
ROX Reference Dye II (50×) | 40 μL | 400 μL | 800 μL |
1 产品概述
本产品是一种采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的2× 浓度的Premix Type 试剂。本品中含有Real Time PCR 反应需要的合适浓度的SYBR Green I，Hot Start 法用DNA 聚合酶，适合Real Time PCR 的Buffer 组合，可以有效抑制非特异性的PCR 扩增，大大提高PCR 的扩增效率，适合进行高灵敏度的Real Time PCR 扩增反应。
本产品适用于快速Real Time PCR 扩增反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。
本产品预先混有Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料、稳定剂和镁离子等通用组分，只需加入模板、引物、双蒸馏水便可进行Real Time PCR 反应，操作简单方便。
本品中的ROX Reference Dye 用于校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。例如，使用Life Technologies 的Real Time PCR 扩增仪进行实验时，就需要进行校正。
无须添加 ROXBio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5; Eppendorf: MasterCycler RealPlex and RealPlex2;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000; Roche: LightCycler 480; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
ROX Reference DyeABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT (Fast); ABI StepOne (Plus)
ROX Reference Dye IIABI: 7500 (Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems; Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000; Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon
2 操作说明
1. 配置反应体系
建议的模板量10-100 ng (基因组 DNA)或 1-10 ng (cDNA 模板)。按下列组份配制 PCR 反应液(反应液配制请在冰上进行)
试剂 | 10 μL体系 | 20 μL体系 | 50 μL体系 | 终浓度 |
SYBR Master mix (2×) | 5 μL | 10 μL | 25 μL | 1× |
PCR Forward Primer (10 μM) | 0.2 μL | 0.4 μL | 1 μL | 0.2 μM |
PCR Reverse Primer (10 μM) | 0.2 μL | 0.4 μL | 1 μL | 0.2 μM |
Reference Dye (optional) | 0.2 μL | 0.4 μL | 1 μL | 1× |
DNA 模板 | 1 μL | 2 μL | 4 μL |
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ddH2O (双蒸馏水) | 3.4 μL | 6.8 μL | 18 μL |
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Total | 10 μL | 20 μL | 50 μL |
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注：
a. 通常引物终浓度为0.2 μM 可以得到较好的结果。反应性能较差时，可以在0.1~1.0 μM 范围内调整引物浓度。
b. 在20 μL 反应体系中，DNA 模板的添加量通常在100 ng 以下。因不同种类的DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定合适的DNA 模板添加量。
c. 按照各仪器推荐体系进行反应液配制。
2. 进行Real Time PCR 反应
建议采用下列图表显示的两步法PCR 反应程序，如果该程序得不到良好的实验结果时，再进行PCR 条件的优化。由于使用Tm 值较低的引物等原因，两步法PCR 反应扩增性能较差时，可以尝试进行三步法PCR 扩增反应。
两步法 PCR 反应三步法 PCR 反应
注：
a. 95℃ 加热 5 min 激活热启动DNA 聚合酶；b. 如果扩增序列富含GC，激活时间需延长至10 min。
保存条件
-20℃ 18 个 月
避光保存，避免反复冻融。
注意事项
1. 使用前，请上下轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，防止因混合不均匀造成的反应效果不佳。
a. 请勿涡旋振荡混匀。
b. SYBR Green qPCR Master Mix (2×) 在 -80℃ 存放可能会产生白色或淡黄色沉淀，用手握缓慢溶解，于室温短时间避光放置，轻柔上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。
c. 沉淀会导致溶液成分不均匀，使用前务必充分混匀试剂。
2. 配制反应液时，试剂请于冰上放置。
3. 本制品中含有荧光染料SYBR Green I ，配制PCR 反应液时避免强光照射。
4. 反应液的配制、分装请一定使用新(无污染)枪头、Microtube 等，避免污染。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
