原核细胞蛋白表达与纯化

原核细胞蛋白表达与纯化

定义

原核表达即将动、植物的目标靶基因片段连接至合适的原核表达载体中，并转化进入原核细胞，随后利用细菌自身的蛋白质表达系统进行目标蛋白质的重组表达。原核表达系统是远今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，其优点是实验周期短、成本低、产量高。大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。

真核基因在大肠杆菌中表达，必须有合适的表达载体，常用载体：pBV220，pET系统

目的基因在大肠杆菌中表达的情况：

大肠杆菌更适合原核基因的表达，外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的，而单位体积产量与细胞浓度和每个细胞平均表达产量呈正相相关。细胞浓度与生长速率，外源基因拷贝数和表达产物产量之间存在动态平衡，单个细胞的产量又与外源基因拷贝数，基因表达效率，表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。

例如，科学家们把人的胰岛素基因送到大肠杆菌的细胞里，让胰岛素基因和大肠杆菌的遗传物质相结合。人的胰岛素基因在大肠杆菌的细胞里指挥着大肠杆菌生产出了人的胰岛素。并随着它的繁殖，胰岛素基因也一代代的传了下去，后代的大肠杆菌也能生产胰岛素了。这种带上了人工给予的新的遗传性状的细菌，被称为基因工程菌。

服务内容

1、依据客户需求，客户提供目的基因，我们将其克隆到表达载体上进行表达并优化表达条件。

2、提供pET系列(GST/ His) 、pGEX系列(GST) 、pTYB1 (无标签重组蛋白)、pMAL-c2x (MBP) , pQE3 (His)等克隆标签表达载体。

客户须知

1、客户需提供表达质粒、表达菌株及表达条件，并提供详细的信息；若需本公司构建重组质粒， 需另计费；

2、客户需确保实验材料及信息的准确性，如基因模板或表达质粒本身具有碱基突变，由此造成的实验延误、重复实验费用或其它经济损失均由客户承担；

3、公司将对蛋白表达体系进行优化，但如涉及定点突变或特殊表达宿主，则需另计费；

4、由于原核表达的局限性，我们不保证重组蛋白有完全的生物学活性。

终产品

1、提供表达菌株(冻存于10%甘油中)，构建结果报告(如有构建服务)；

2、提供相应质量的重组蛋白，表达实验报告。