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逆转录病毒(RV)构建与包装发表时间:2019-05-09 17:00 逆转录病毒(RV)构建与包装 定义 逆转录病毒是一类RNA病毒。在逆转录酶的作用下,以病毒RNA为模板合成cDNA,再通过DNA复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。 逆转录病毒载体优点: 1、转染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等; 2、转入的外源基因可完全整合; 3、对细胞感染率高,达到100 %; 4、 感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。 逆转录病毒载体的缺点: 1、只能整合至分裂期细胞; 2、可插入外源基因片断小(<10kb),难以满足较大基因的插入; 3、病毒滴度是限制临床应用的主要方面; 4、有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能,随机整合可能产生不良作用。 逆转录病毒包装程序 1、将基因克隆到表达载体上, 2、转染逆转录病毒包装细胞系,培养后收集上清制备病毒粗提液, 3、病毒纯化、浓缩(根据客户需要), 4、测定病毒滴度 客户提供 1、含有目标基因的质粒(提供测序图谱)或所要表达的目的基因的名称、序列; 2、所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化 3、若需要检测外源基因的表达,如需要请提供相应的抗体 服务承诺 提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的病毒储存液,重组后的逆转录表达载体质粒 |