原位杂交

原位杂交

定义

原位杂交技术（in situ hybridization）是以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。这一技术不需要从组织细胞中提取核酸，对组织中含量极低的靶序列有很高的灵敏度，并可保持组织与细胞的结构完整，反映特异核酸分子的定位。特别是配合使用能定位特异蛋白分子的免疫细胞化学技术，就能对生理或病理条件下从DNA到mRNA到蛋白质这样一个基因表达过程进行定性和定位的分析，是基因表达研究强有力的手段。

一般实验流程

原位杂交技术的实验方法主要包括：标记探针的准备，组织样品制备，杂交和杂交体探测。

1、标记探针的准备

对cDNA、RNA和寡核苷酸三种探针的选择，要考虑所要检测的靶核酸分子的性质，如cDNA 和RNA 适宜于检测mRNA分子，寡核苷酸对mRNA的杂交效率和特异性都不如RNA探针。

2、组织样品制备

光镜原位杂交标本的固定多使用4%多聚甲醛，常规石蜡包埋和切片，但在操作过程中应提防RNA酶污染。电镜原位杂交标本的固定也采用4%多聚甲醛。与免疫细胞化学技术一样，电镜水平的原位杂交可以在未经包埋的组织切片上进行，称包埋前技术；也可以在超薄切片上进行，称包埋后技术。冷冻切片能较好的保存靶核酸因而较易获得杂交信号，但对细胞结构的保存较差。

3、杂交

杂交是在一定温度和离子强度条件下让标记探针与组织中靶分子结合的过程。杂交的效率和特异性是优化杂交条件的出发点，也是需要兼顾的两个方面。影响因素主要是探针的结构、杂交温度、杂交液中的甲酰胺浓度和离子强度、杂交后漂洗等。要通过实验对条件进行优化。

4、杂交体探测

根据探针标记物的不同采用放射自显影方法或免疫细胞化学方法显示杂交结果。

服务内容

1、根据客户送的样本（已固定的组材料/包埋好的蜡块）以及样本类型，安排实验；

2、包埋或者切片后，根据客户所测指标，设计特异性探针，标记示踪物（荧光集团或者地高辛）。然后进行原位杂交检测。

3、对检测后的结果进行显微照相。

终产品

1、检测后的切片；

2、每张切片根据需要可提供一张照片；

3、完整实验报告