免疫沉淀 (IP)

免疫沉淀 (IP)

定义

经典的免疫沉淀是可溶性抗原与其抗体产生可见沉淀反应的血清学试验。后来发展为抗原抗体结合后，用固相化的蛋白A或蛋白G小珠等来吸附分离抗原抗体复合体，达到检测微量抗原或抗体的目的。

原理

免疫沉淀是根据抗原抗体结合原理、使用特异性的抗体以及protein A/G-coupled agarose beads从细胞或者组织裂解物标本中特异性纯化目的蛋白的方式。因为使用的是物理性性的分离办法，纯化后的蛋白可进一步进行其他实验和研究，如：WB。

一般实验过程

1、收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清；

2、取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；

3、免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 g速度离心5 min,将protein A/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次；最后加入15μl的2×SDS 加样缓冲液，沸水煮10分钟；

4、SDS-PAGE, Western blotting或进行质谱分析。

服务内容

1、 样品处理。

2、样品、抗体与protern/G sepharose孵育。

3、抗原、抗体与protern/G sepharose复合物洗涤。

4、共沉淀产物鉴定。

样品要求

1、客户需提供待检测样品、免疫沉淀用抗体及检测用抗体。

2、待检测样品可以是直接的待检测蛋白样品，细胞、组织或细菌样品，但需收取蛋白抽提费用。

3、免疫共沉淀(co-IP)通常使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。

终产品

检测结果及实验报告。