MTT或CCK8细胞增殖及活性检测

MTT或CCK8细胞增殖及活性检测

原理

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。

MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

MTT主要有两个用途：

1、药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；

2、细胞增殖及细胞活性测定。

一般检测实验步骤

1、接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。

2、培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。

3、呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul。继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解。

4、比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

客户须知

客户需提供：足量样品、样品信息（如细胞类型、分子量、溶解性、稳定性、保存条件等）、相关实验设计内容（如样品作用时间、浓度等）、细胞株等。武汉市内可上门取样，外地需邮寄样本请提前咨询。

终产品

实验结果及完整的实验报告。