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miRNA相关技术

发表时间:2019-05-09 16:52

miRNA相关技术包括:


1) microRNA QPCR检测


2) miRNA过表达慢病毒构建与包装


3) miRNA过表达腺病毒构建与包装


4) miRNA调控类腺相关病毒构建与包装




定义


微小RNA(microRNA,简称miRNA)是生物体内源长度约为20-23个核苷酸的非编码单链小分子RNA,通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的降解或翻译抑制。是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(双链)但是和siRNA密切相关。普通实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料,对荧光信号实时检测进而了解整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。



特点


对于成熟的microRNA而言,其片段由21-25个核苷酸组成,长度太短,不能通过传统的实时定量PCR进行检测。需要对其引物设计方面有较高的要求,既可以通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,也可以通过对目的片段终端的改造再设计引物,而后配合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平,也可以用终点PCR法定性检测。




一般实验流程:

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服务内容


1、根据检测目的进行引物设计,并抽提RNA;

2、经过严格定量后对样品进行逆转录;

3、通过定量PCR检测目的microRNA,并对结果进行分析;

4、向客户提交原始数据和结果报告单。


客户提供


组织样本和待检测miRNAs信息。


终产品


荧光定量PCR的原始数据及详细的实验结果和方法报告单。


质量保证


扩增产物有良好的熔解曲线;

阳性结果可重复性良好。


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