miRNA相关技术

miRNA相关技术包括：

1) microRNA QPCR检测

2) miRNA过表达慢病毒构建与包装

3) miRNA过表达腺病毒构建与包装

4) miRNA调控类腺相关病毒构建与包装

定义

微小RNA(microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20－23个核苷酸的非编码单链小分子RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。普通实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料，对荧光信号实时检测进而了解整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

特点

对于成熟的microRNA而言，其片段由21-25个核苷酸组成，长度太短，不能通过传统的实时定量PCR进行检测。需要对其引物设计方面有较高的要求，既可以通过特殊设计的茎环结构的反转录引物，也可以通过对目的片段终端的改造再设计引物，而后配合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平，也可以用终点PCR法定性检测。

一般实验流程：

服务内容

1、根据检测目的进行引物设计，并抽提RNA；

2、经过严格定量后对样品进行逆转录；

3、通过定量PCR检测目的microRNA，并对结果进行分析；

4、向客户提交原始数据和结果报告单。

客户提供

组织样本和待检测miRNAs信息。

终产品

荧光定量PCR的原始数据及详细的实验结果和方法报告单。

质量保证

扩增产物有良好的熔解曲线；

阳性结果可重复性良好。