核酸提取与纯化技术

核酸提取与纯化技术

细胞、动物组织、植物样本和血液RNA提取

转染级质粒大规模制备

基因组提取

培养细胞总RNA提取

定义

在生物体内发现主要有四种不同的RNA分子在基因的表达过程中起重要的作用。它们是信使RNA（messengerRNA，mRNA）、转移RNA（transferRNA，tRNA）、核糖体RNA（ribosomalRNA，rRNA）、微小RNA（microRNA，miRNA）。

实验步骤

1、提取培养细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10×106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打振荡以裂解细胞；

2、将培养细胞的Trizol裂解液转入EP管中，室温放置5分钟；

3、在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，用力震荡15秒，室温放置2～3分钟后，12000g 4℃离心15分钟；

4、取上层水相置于新EP管，按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，室温放置10分钟,12000g4℃离心10分钟；

5、弃上清，按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g4℃离心5分钟，弃上清；

6、RNA沉淀于室温自然干燥；

7、用Rnase-free water 溶解RNA沉淀，然后电泳检测

服务内容

从培养细胞中提取总RNA，通过电泳及OD值测定检测RNA纯度

终产品

1、客户需求的RNA提取样本

2、完整实验报告，电泳照片， OD值

服务说明

1、细菌、细胞样品需新鲜培养，动物组织、植物组织等样品取样后需液氮或-80℃速冻

2、用于提取基因组RNA的血液样品在4℃下可保存一周，-20℃下可保存1个月

3、服务开始前，请与我们及时沟通，以安排科学地取样，实验样品最好使用干冰运输（杭州地区可以上门取样）

转染级质粒大规模制备

定义

常规方法提取的质粒由于浓度低且内毒素含量较高，不能直接用于细胞转染实验。利用高品质质粒抽提试剂可为您提供转染级别的大提质粒，可直接用于细胞转染实验。

实验步骤

1、挑取琼脂培养皿上的单个菌落，移至3-10mlLB培养液中，37℃150rpm培养过夜。   

2、取1.5ml培养液移至Eppendorf管内，12000rpm离心1分钟，弃上清液。

3、将细菌沉淀悬浮于100μl溶液（GTE溶液）中，强烈振荡使之充分混匀。

4、加入200μl新鲜配置的溶液（NaOH/SDS溶液），盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合内容物，置冰上5-10分钟。

5、加入150μl溶液（5mol/L乙酸钠，pH5.2），轻轻颠倒数次，使溶液充分混匀，冰上放置3-5分钟。

6、10000rpm,4℃下离心10分钟，将上清液转移至另一离心管中。

7、加等体积的酚:氯仿，振荡混匀，10000rpm,4℃离心2min，将上清转移至另一离心管中。

8、加两倍体积无水乙醇沉淀双链DNA，充分混匀，室内放置2分钟

9、10000rpm,4℃下离心10分钟。

10、弃上清液，加1ml70％乙醇洗涤沉淀双链DNA，10000rmp，4℃下离心5分钟，倒尽乙醇，吸干管口残留乙醇。

样品要求

客户请提供≥100ng的质粒样品或含有目的质粒的菌种，以满足琼脂糖凝胶电泳检测及转化需要。

服务说明

1、如果您提供的质粒拷贝数低(1ml培养提取量<1μg)，实验费用需要额外增加。

2、我们提供氨苄青霉素、卡那霉素和氯霉素抗生素；使用其它抗生素时，需要您提供抗生素及抗生素的工作浓度。

3、如果需要进行质粒鉴定(如酶切鉴定、PCR鉴定或测序鉴定等)，请提供鉴定的方法，费用额外收取。客户寄来的质粒经鉴定为非目的质粒时，将收取鉴定发生的费用。

终产品

质粒 (1.7≤OD260/OD280≤2.0)、保存菌种；

完整实验报告：电泳照片，OD值测定结果。

基因组提取

原理

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有：1、物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法；2、化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法；3、生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

服务内容

从动、植物组织，血液，细菌，细胞等多种材料中提取基因组DNA，并通过检测OD值和琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA质量。

终产品

1、提供可用于普通PCR，酶切等相关试验的基因组DNA

2、提供电泳图及试验报告。