杭州苹谷生物科技有限公司
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核酸提取与纯化技术

发表时间:2019-05-09 16:51

核酸提取与纯化技术


细胞、动物组织、植物样本和血液RNA提取


转染级质粒大规模制备


基因组提取



培养细胞总RNA提取


定义


在生物体内发现主要有四种不同的RNA分子在基因的表达过程中起重要的作用。它们是信使RNA(messengerRNA,mRNA)、转移RNA(transferRNA,tRNA)、核糖体RNA(ribosomalRNA,rRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA)。


实验步骤


1、提取培养细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10×106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打振荡以裂解细胞;


2、将培养细胞的Trizol裂解液转入EP管中,室温放置5分钟;


3、在上述EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,用力震荡15秒,室温放置2~3分钟后,12000g 4℃离心15分钟;


4、取上层水相置于新EP管,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,室温放置10分钟,12000g4℃离心10分钟;


5、弃上清,按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g4℃离心5分钟,弃上清;


6、RNA沉淀于室温自然干燥;


7、用Rnase-free water 溶解RNA沉淀,然后电泳检测


服务内容


从培养细胞中提取总RNA,通过电泳及OD值测定检测RNA纯度


终产品


1、客户需求的RNA提取样本


2、完整实验报告,电泳照片, OD值


服务说明


1、细菌、细胞样品需新鲜培养,动物组织、植物组织等样品取样后需液氮或-80℃速冻


2、用于提取基因组RNA的血液样品在4℃下可保存一周,-20℃下可保存1个月


3、服务开始前,请与我们及时沟通,以安排科学地取样,实验样品最好使用干冰运输(杭州地区可以上门取样)



转染级质粒大规模制备


定义


常规方法提取的质粒由于浓度低且内毒素含量较高,不能直接用于细胞转染实验。利用高品质质粒抽提试剂可为您提供转染级别的大提质粒,可直接用于细胞转染实验。


实验步骤


1、挑取琼脂培养皿上的单个菌落,移至3-10mlLB培养液中,37℃150rpm培养过夜。   

2、取1.5ml培养液移至Eppendorf管内,12000rpm离心1分钟,弃上清液。

3、将细菌沉淀悬浮于100μl溶液(GTE溶液)中,强烈振荡使之充分混匀。

4、加入200μl新鲜配置的溶液(NaOH/SDS溶液),盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合内容物,置冰上5-10分钟。

5、加入150μl溶液(5mol/L乙酸钠,pH5.2),轻轻颠倒数次,使溶液充分混匀,冰上放置3-5分钟。


6、10000rpm,4℃下离心10分钟,将上清液转移至另一离心管中。

7、加等体积的酚:氯仿,振荡混匀,10000rpm,4℃离心2min,将上清转移至另一离心管中。

8、加两倍体积无水乙醇沉淀双链DNA,充分混匀,室内放置2分钟

9、10000rpm,4℃下离心10分钟。

10、弃上清液,加1ml70%乙醇洗涤沉淀双链DNA,10000rmp,4℃下离心5分钟,倒尽乙醇,吸干管口残留乙醇。


样品要求


客户请提供≥100ng的质粒样品或含有目的质粒的菌种,以满足琼脂糖凝胶电泳检测及转化需要。


服务说明


1、如果您提供的质粒拷贝数低(1ml培养提取量<1μg),实验费用需要额外增加。

2、我们提供氨苄青霉素、卡那霉素和氯霉素抗生素;使用其它抗生素时,需要您提供抗生素及抗生素的工作浓度。

3、如果需要进行质粒鉴定(如酶切鉴定、PCR鉴定或测序鉴定等),请提供鉴定的方法,费用额外收取。客户寄来的质粒经鉴定为非目的质粒时,将收取鉴定发生的费用。


终产品


质粒 (1.7≤OD260/OD280≤2.0)、保存菌种;


完整实验报告:电泳照片,OD值测定结果。



基因组提取


原理


制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法,其他的方法还有:1、物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法;2、化学方式:异硫氰酸胍法,碱裂解法;3、生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等


服务内容


从动、植物组织,血液,细菌,细胞等多种材料中提取基因组DNA,并通过检测OD值和琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA质量。


终产品


1、提供可用于普通PCR,酶切等相关试验的基因组DNA


2、提供电泳图及试验报告。


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